大肠杆菌属和沙门氏菌属大约1、02亿年前分化(可信区间：57–176mya)，这与它们宿主的分化是一致的：前者见于哺乳动物，后者见于鸟类和爬行动物。接下来是一个大肠杆菌属祖先分成五个物种(E.albertii，E.coli，E.fergusonii，E.hermannii，andE.vulneris、)，河南甲基球状菌。大肠杆菌的然后一个祖先是在两千万到三千万年前分裂的。1988年，河南甲基球状菌，理查德，河南甲基球状菌.兰斯基(RichardLenski)开始利用大肠杆菌进行长期进化实验，在实验室里直接观察了6.5万多代大肠杆菌的基因组进化。[33]例如，大肠杆菌通常不具有以柠檬酸盐作为碳源有氧生长的能力，而柠檬酸盐被用作区分的诊断标准，用以将大肠杆菌与其他密切相关的细菌(如沙门氏菌)区分开来。在这个实验中，一群大肠杆菌出人意料地进化出有氧代谢柠檬酸盐的能力，这是一个具有微生物物种形成特征的重大进化转变。目前人们从枯草芽孢杆菌不同菌株的代谢产物中分离纯化了多种有效的抗类菌物质。河南甲基球状菌

铜绿假单胞菌低温保存法主要为简单保存法，将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4摄氏度冰箱保存，保存时间不超过1~2个月，若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡，以隔绝外界空气和水汽，保持时间可达3~4个月。液氮较低温保存法，将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中，密封于安瓿管内，然后控制冷却速度，使安瓿管温度逐步下降至-35摄氏度时，即可置于-150~-196摄氏度的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物，都可用此法长期保存。西藏嗜盐碱红菌菌株枯草芽孢杆菌进入人体后，能100%到达大小肠，抑制致病菌，促进有益厌氧菌生长。

铜绿假单胞杆菌的载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当普遍。寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内影响并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30摄氏度，-50-80摄氏度)、干冰酒精快速冻结(约-70摄氏度)和液氮(-196摄氏度)等保藏法。冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70摄氏度左右)下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。

大肠杆菌的培养：将保藏状态的菌种放入适宜的培养基中培养，逐级扩大培养得到纯而壮的培养物，即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物。菌种发酵有一般需要2-3代的复壮过程，因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化，让菌种逐渐适应培养环境。菌种经过冷冻干燥后，生长延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长。将菌种接种至一新鲜培养基上，每萌发一次即为一代，因此，当原始菌种复溶并转至新培养基内生长，即认为已传代一次，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥的菌种为第0代，冷冻干燥的原始菌种开启后转种为第1代，直到第3代为工作菌种。菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代。直接从冻存摇的菌甘油放了不少可能会抑制菌的生长，活力差，而且多余的甘油对细菌生长不利，经划板的菌株活力好，可以挑菌摇菌提质粒或者做表达用。枯草芽孢杆菌能够促使土壤中的有机质分解成腐殖质，刺激作物生长。

制备大肠杆菌感受态细胞的关键是什么？（1）感受态细胞的质量：所用的CaCl2等试剂均需是至高纯度的，并用至纯净的水配制，建议分装保存于4℃。（2）细胞的生长状态和密度建议从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。不要用已经过多次转接，及贮存在4℃的培养菌液。细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在5×107个左右为佳。即应用对数期或对数生长前期的细菌，可通过测定培养液的OD600控制。对TG1菌株，OD600为0、5时，细胞密度在5×107个/ml左右。（应注意OD600值与细胞数之间的关系随菌株的不同而不同）。密度过高或不足均会使转化率下降。大肠杆菌在人之间的传播途径多是通过粪-口这一传播途径。新疆糖丝菌菌株

枯草芽孢杆菌的菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色。河南甲基球状菌

铜绿假单胞菌生长对营养要求不高。对有正常菌群存在的临床标本或采自环境中的标本应接种选择性培养基如麦康凯琼脂培养基(MAC)；对无正常菌群存在的临床标本如血液、脑脊液、穿刺液等可接种普通全营养型培养基(如TSA、PCA、营养琼脂}或血琼脂培养基、铜绿假单胞菌培养基。普通琼脂培养基上生长18~24h可以见到扁平、湿润的菌落，铜绿假单胞菌所产生的带荧光的水溶性青脓素与绿脓素相结合将使得培养基呈亮绿色；在血琼脂平板上生长时可以见到在菌落的周围有溶血环，菌落呈金属光泽；在铜绿假单胞菌培养基上呈蓝绿色或者红褐色菌落，365nm紫外灯下显荧光。如果是在液体培养基中则呈浑浊状生长，在液体表面形成菌落，而在培养基底部细菌的生长不良。河南甲基球状菌

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